Тонкослойная хроматография. Применение в фармацииМатериалы / Тонкослойная хроматография. Применение в фармацииСтраница 12
Нами изучался флавоноидный состав в отдельных видах рода чина: ч.посевная (I), члуговая (II), ч.весенняя (III), ч.лесная (IV).
С целью возможного использования липидного комплекса в пищевых добавках и лекарственных препаратах нами также изучался полный фракционный состав липидов в траве и семенах чины.
Материалы и методы
Выделение липидной фракции из сухого сырья проводили по методу Блая и Дайера.
К навеске (0,2 г) сухого растительного сырья добавляли 1,6 мл дистиллированной воды и выдерживали в течение суток на холоду. Затем добавляли 6 мл смеси хлороформ — метанол (1 :2) и оставляли на 3 суток, после чего центрифугировали при 8 тыс. об/мин — 15 мин. К прозрачному супернатанту добавляли 2 мл воды и 2 мл хлороформа. Образовавшуюся 2-х фазную систему разделяли в делительной воронке. Хлороформный слой дважды промывался метанолом и упаривался досуха на роторном испарителе. Остаток сушили в вакуум-эксикаторе, затем разбавляли хлороформом до концентрации 10 мг/мл и раствор хранили в стабилизированном хлороформе при + 4°С.
Качественный анализ липидной фракции проводили с использованием метода ТСХ на пластинах Кизельгель 60 (254) в следующих системах растворителей:
А. Для нейтральных липидов: 1) Гексан — бензол (9:1) [4]; 2) Гексан — эфир — уксусная кислота (90:10:1) [5].
Б. Для полярных липидов (фосфолипидов): 1) хлороформ — ацетон — метанол — уксусная кислота — вода (6:8:2:2:1), кислый; 2) хлороформ — мета-
нол — 26% аммиак (65:25:5), основной; 3) хлороформ — метанол — вода (65:25:4), нейтральный.
При определении качественного состава фосфолипидов их идентификация проводилась с использованием различных проявителей (пары йода, нингидрин, реактив Драгендорфа, серная кислота) и с помощью Rf стандартов.
Вышеперечисленный набор систем и реактивов позволил исчерпывающе провести анализ липидных фракций, выделенных из образцов чины.
Для изучения флавоноидного состава с учетом фаз вегетации были выбраны следующие образцы: I (фаза цветения); IV (фаза цветения); III (сочевичник) фаза бутонизации; II (фаза цветения); II (фаза плодоношения); II (фаза вегетации до цветения).
Выделение флавоноидов из сухого сырья проводилось по методике, обеспечивающей их исчерпывающую экстракцию.
С этой целью, 1 г измельченной травы помещали в колбу с обратным холодильником, заливали 20 мл 70 % этанолом и кипятили в течение 20 мин на водяной бане. Экстракт охлаждали, фильтровали через стеклянный фильтр Шотта и упаривали досуха на роторном испарителе. Остаток растворяли в спирте этиловом до конечной концентрации вещества 10 мг/мл. Определение суммарного содержания флавоноидов проводилось с использованием рутина в качестве стандарта. Результаты этого исследования приведены в табл. 3.
Определение качественного состава флавоноидов проводилось методом ТСХ на пластинках Кизельгель 60(254) фирмы Мерк, в системе растворителей н-бутанол — уксусная кислота — вода (6:1:2). Обнаружитель — серная кислота при УФ (254 нм) — пятна флавоноидов сиреневого цвета на зеленом фоне.
Таблица 1
Суммарное содержание флавоноидов в сырье (трава) различных видов чины (в %, в пересчете на абсолютно сухую массу)
№ п\п | Вид чины | Содержание суммы флавоноидов (%) |
1 |
I, фаза цветения | 4,51 |
2 |
IV, фаза цветения | 1,23 |
3 |
III, (сочевичник), фаза бутонизации | 0,28 |
4 |
II, фаза цветения | 3,56 |
5 |
II, фаза плодоношения | 1,50 |
6 |
II, фаза вегетации. До цветения | 1,25 |